Реакция иммунофлюоресценции (риф)

В качестве метки используются светящиеся флюорохромные красители (изотиоционат флюоресцеина и др.).

Существуют различные модификации РИФ. Для экспресс – диагностики инфекционных заболеваний — для выявления микробов или их антигенов в исследуемом материале применяется РИФ по Кунсу.

Выделяют два метода РИФ по Кунсу: прямой и непрямой.

Компоненты прямой РИФ:

1) исследуемый материал (испражнение, отделяемое носоглотки и др.)

2) меченая специфическая иммунная сыворотка, содержащая АТ-ла к искомому антигену

3) изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала обрабатывают меченой антисывороткой.

Происходит реакция АГ-АТ. При люминесцентном микроскопическом исследовании в том участке, где локализуются комплексы АГ–АТ, обнаруживают флюоресценцию – свечение.

Компоненты непрямой РИФ:

1) исследуемый материал.

2) специфическая антисыворотка.

3) антиглобулиновая сыворотка (АТ–ла против иммуноглобулина), меченная флюорохромом

4) изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала сначала обрабатывают иммунной сывороткой к искомому антигену, а затем – меченной антиглобулиновой сывороткой.

Светящиеся комплексы АГ-АТ – меченные АТ обнаруживаются при помощи люминесцентного микроскопа (см. раздел 3, рис. 9 и 10).

Преимущество непрямого метода состоит в том, что нет необходимости приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сывороток, а применяется лишь одна флюоресцирующая антиглобулиновая сыворотка.

Также выделяют 4-х компонентную разновидность непрямой РИФ, когда дополнительно вводится комплемент (сыворотка морской свинки). При положительной реакции образуется комплекс АГ — АТ – меченные АТ-комплемент.

Основы иммуноферментного анализа


Читать еще…

Понравилась статья? Поделиться с друзьями: